Las técnicas para la detección y enumeración de microorganismos, en función de su capacidad para crecer en medios de cultivo específicos, son un medio importante y ampliamente utilizado para evaluar la calidad microbiológica del agua. La norma UNE-EN ISO 8199, de la que AENOR acaba de publicar una versión actualizada, establece requisitos y orientaciones para el examen de microorganismos en el agua, mediante cultivo.
Las técnicas basadas en el cultivo para detectar y enumerar microorganismos en muestras de agua son una herramienta ampliamente utilizada para evaluar la calidad microbiológica del agua. Como punto de referencia, la norma UNE-EN ISO 8199, sobre calidad del agua, establece requisitos y orientaciones generales para el examen de microorganismos mediante cultivo. Una nueva edición de esta norma, la UNE-EN ISO 8199-2018, cancela y reemplaza a la anterior, de 2005, que ha sido técnicamente revisada.
El propósito de la UNE-EN ISO 8199-2018 es reunir en un solo documento información común a las diversas técnicas, lo que reduce la repetición de detalles técnicos en estándares individuales y facilita la elección de la técnica más adecuada para situaciones particulares. La norma especifica los requisitos y proporciona orientación sobre las manipulaciones que son comunes a las distintas técnicas de cultivo para el examen microbiológico del agua, en particular la preparación de las muestras, los medios de cultivo, el equipamiento general y material de vidrio, salvo que se requiera otra cosa en la norma específica.
Se incluye también información sobre temas generales relevantes para estas técnicas, como son el control de calidad analítico, las características de rendimiento del método y la incertidumbre de los resultados de las pruebas.
La norma es de aplicación principalmente en los análisis de bacterias, levaduras y mohos, pero algunos aspectos también son aplicables a bacteriófagos, virus y parásitos. Se excluyen las técnicas no basadas en el cultivo de microorganismos, como por ejemplo los métodos de reacción en cadena de la polimerasa
(PCR).
Contenido de la norma
Prólogo europeo
Declaración
Prólogo
0 Introducción
1 Objeto y campo de aplicación
2 Normas para consulta
3 Términos y definiciones
4 Fundamento
5 Requisitos generales de las medidas
5.1 Uniformidad de las temperaturas
5.2 Tiempos de incubación
5.3 Volúmenes y masas
6 Diluyentes y medios de cultivo
6.1 Generalidades
6.2 Requisitos de calidad de los ingredientes
6.3 Diluyentes
7 Esterilización y descontaminación
7.1 Esterilización de aparatos y material de vidrio
7.2 Esterilización de consumibles
7.3 Descontaminación de material de vidrio y material después de su utilización
7.4 Gestión de residuos
8 Muestras y manipulación de las muestras
8.1Muestreo
8.2 Preparación de la muestra
8.2.1Aguas y otras matrices acuosas
8.2.2 Hisopos
9 Métodos de recuento (cuantitativos)
9.1 Inoculación de porciones de ensayo sobre (o en) un medio sólido
9.1.1 Generalidades
9.1.2 Técnica de vertido en placa (pour plate)
9.1.3 Técnica de reparto en placa (spread plate)
9.1.4 Técnica de filtración en membrana
9.1.5 Incubación
9.1.6 Recuento y confirmación sobre medios sólidos
9.1.7 Orientación general para el cálculo de resultados
9.1.8 Expresión de resultados
9.2 Recuento utilizando un medio líquido
9.2.1 Generalidades
9.2.2 Procedimiento
9.2.3 Elección del sistema de siembra
9.2.4 Incubación
9.2.5 Interpretación de los resultados
9.2.6 Incertidumbre de los resultados de ensayo
9.2.7 Determinación de los valores de NMP
10 Métodos de detección (cualitativos)
10.1 Generalidades
10.2 Procedimiento
10.3 Incertidumbre de los resultados de ensayo
11 Características de funcionamiento de los métodos
12 Control de calidad analítico
12.1 Generalidades
12.2 Control de calidad interno
12.2.1 Generalidades
12.2.2 Controles de proceso
12.3 Evaluación de la calidad externa
Anexo A (Informativo) Criterios para la selección de la técnica
Anexo B (Informativo) Intervalos de confianza para la técnica de recuento de colonias y selección del método de cálculo en casos especiales
Anexo C (Normativo) Recuento y cálculos con dos placas Petri por dilución
Anexo D (Normativo) Composición, preparación y ensayo de funcionamiento de los diluyentes
Bibliografía
