Científicos del Instituto Universitario de Investigación de Ingeniería del Agua y Medio Ambiente (IIAMA) de la Universitat Politècnica de València (UPV) han desarrollado un método de detección de la bacteria Legionella spp., que permite localizar de forma simultánea tres especies patógenas (L. pneumophila, L. micdadei y L. longbeachae) en apenas ocho horas.
Debido a la importancia para la salud pública que han adquirido en los últimos años los casos y brotes de legionelosis, y dado que los métodos clásicos de detección, aislamiento y recuento en medios de cultivo selectivos requieren largos períodos de incubación, el desarrollo de métodos alternativos más rápidos y eficientes es de gran relevancia.
Los principales focos de propagación de esta bacteria son la red de distribución de agua ya que la bacteria se incorpora a los sistemas de agua sanitaria, ya sea fría o caliente, y a otros que puedan generar aerosoles, tales como duchas, condensadores evaporativos, torres de refrigeración, piscinas o bañeras de hidromasaje (spas y jacuzzis).
Un estudio realizado en el IIAMA propone el uso de un método molecular, más sensible y específico, que combina la PCR-múltiple (reacción en cadena de la polimerasa) con una concentración óptima del colorante Propidio Monoazida (PMA) que, intercalado en el DNA de las células muertas, consigue inhibir su amplificación en la PCR.
Tras doce meses de investigación, científicos del IIAMA han desarrollado un protocolo de detección simultánea de 3 especies patógenas de Legionella spp. (L. pneumophila, L. micdadei y L. longbeachae) que permite localizar el foco de la infección en apenas 8 horas.
Los objetivos fundamentales del estudio eran dar rapidez de resultados de Legionella en aguas, con gran sensibilidad y especificidad, y que dichos resultados correspondieran a células vivas.
El resultado del trabajo realizado es un sistema de detección enzimático mediante una PCR-múltiple (reacción en cadena de la polimerasa) acoplada a un pre-tratamiento con PMA, que determina su viabilidad en un breve espacio de tiempo, “por lo que no es necesario que crezca la bacteria en un medio sintético de laboratorio y luego identificarla como se realiza con el método tradicional”, tal y como indica la directora del proyecto, Yolanda Moreno.
El éxito del proyecto es la combinación de la PCR-múltiple con el PMA. “Nosotros concentramos la muestra, rompemos la bacteria para extraer el ADN y luego identificamos las diferentes especies de Legionella mediante PCR-múltiple. El tratamiento previo con PMA nos permite descartar el ADN de las células muertas por lo que sólo consideramos las células viables, que es otra de las grandes diferencias respecto al método de cultivo, porque en una muestra ambiental puedes tener células viables no cultivables”, afirma Yolanda Moreno.
Este nuevo método permitirá localizar simultáneamente las tres especies de Legionella más importantes. Entre ellas, L. pneumophila, que es la que más frecuentemente se aísla en el hombre, encontrándose presente en el 90% de los casos de legionelosis y de Fiebre de Pontiac.
Fuente: iagua
